Allograft arteriosi criopreservati da donatore multi organo: una nuova strategia per fabbricare vasi sanguigni artificiali adatti alla chirurgia vascolare periferica

L’ischemia critica degli arti inferiori è una condizione morbosa che riduce gravemente il flusso sanguigno e mette a repentaglio la conservabilità dell’arto colpito. Il trattamento standard è rappresentato dal bypass femoro-popliteo. Per questo tipo di rivascolarizzazione ci si avvale di protesi sintetiche o di graft in vena. Un approccio alternativo è l'uso di tessuti vascolari nativi decellularizzati, dotati di maggiore biocompatibilità rispetto agli altri e presumibilmente ottimi modelli 3D per guidare la crescita di cellule staminali. Lo scopo di questa ricerca è sviluppare una metodologia per ottenere allograft di piccolo calibro cell-free da utilizzare come scaffold naturali compatibili con la crescita cellulare in vivo e il loro assemblaggio in pseudo-tessuti, eliminando fallimenti dovuti all’attivazione della risposta immunitaria. Materiali e metodi: Abbiamo isolato dal cordone ombelicale umano cellule mesenchimali. La caratterizzazione con tecniche di immunofluorescenza e molecolari ha rivelato un profilo staminale. La decellularizzazione di segmenti vascolari è stata effettuata utilizzando un protocollo, che associa shock ipotonico e l’utilizzo di detergenti ionici. Le cellule sono state seminate su cell-free scaffold utilizzando come carrier fibrina e trombina, dopo 4 giorni di coltura statica in DMEM sono stati posti per 2 settimane in un bireattore a flusso che mima il fisiologico flusso pulsatile cardiovascolare. Al termine della coltura dinamica, i campioni sono stati processati per analisi istologiche, biochimiche e ultrastrutturali. Risultati e discussione: L’analisi istologica ha mostrato una propensione delle cellule a aderire e penetrare nel tessuto. Inoltre la colorazione Sirius Red ha rivelato la neoproduzione fibre di collagene III dato confermato dall'analisi ultrastrutturale dalla quale è emersa la presenza di fibre di collagene di 30 nm, presumibilmente corrispondente al collagene immaturo. Questi dati confermano la capacità delle cellule ombelicali di ricellularizzare tessuti nativi cell-free. Questo risultato rende gli scaffold naturali decellularizzati validi candidati per interventi di bypass.