Densità e distribuzione delle cellule di Purkinje nel cervelletto di cane: studio immunoistochimico

Nella letteratura, gli studi morfologici e morfometrici del cervelletto di animali ed esseri umani, hanno valutato il numero di cellule di Purkinje (CP) solo su alcuni campi a random. Gli studi sono stati spesso condotti su cervelletti fissati in formalina e inclusi in paraffina; gli studi effettuati su campioni congelati sono molto rari. Gli scopi del presente studio sono stati: quantificare il numero e la distribuzione delle CP in tutto il tessuto cerebellare; valutare lo spessore del granulari e strati molecolari. sono stati analizzati otto cervelletti da pazienti di età da due mesi a 16 anni. Tutti i campioni sono stati fissati in paraformaldeide, poi il verme cerebellare è stato diviso sul piano mediano in due parti. Una metà è stata preparata per congelamento e stoccata a - 80 ° C, mentre l'altra metà è stata conservata a + 4 ° C. Da questi campioni sono stati ottenuti sezioni sagittali su cui sono stati eseguiti reazioni di immunofluorescenza indiretta e immunoenzimatica (DAB), utilizzando l'anticorpo policlonale anti-calbindina (28 kDa). Sulla sezione totale è stata poi eseguita la conta manuale di tutti CP lungo ogni lobulo. Per la valutazione degli spessori degli strati della corteccia cerebellare, abbiamo eseguito nove misure per lobo. Sulle sezioni adiacenti è stato eseguito ematossilina-eosina per verificare l'integrità e la qualità della preparazione del tessuto. L'intensa immunoreattività alla calbindina di tutte le CP genera una migliore risoluzione d'immagine. La valutazione del numero di CP per tutta la lunghezza dello strato ha permesso di ottenere un valore più accurato con una deviazione standard inferiore. Inoltre, ha permesso di identificare le aree cerebellari in cui il CP non hanno una distribuzione omogenea